Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展平稳的过程中逐渐扩展

从第一次注意到胰岛自身特异性到注意到1标准型癌症临床数据分析病人的成果赴援在成人末期就有很好的描述，多个胰岛自身特异性感染性的成人之后有70%在血液转换后10短期内患上癌症，而随访15年的成人这一比重上升到84%。相对于之下，占有临床数据分析1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的肺癌机制还不能得到充分的数据分析。

越来越多的人开始运用于分期系统来定义1标准型癌症的成果：幼体在注意到多种胰岛自身特异性时进到第1阶段性，注意到体温异常时进到第2阶段性，注意到病人时进到第3阶段性。一些多发胰岛自身特异性感染性的幼体，在1期和2期，成果较慢，并持续发展为肺癌的1标准型癌症。我们之后描述了一四组在首次样品到多种胰岛自身特异性检验后至少10年无癌症的极慢成果者，这四组病人人数少，但不同之处非常明确。随后，我们发现胰岛自身抗原甲基化CD8+T蛋白质加成在成果较快的病人之后基本不存在，但在近期肺癌和长期存在的癌症病人之后很容易样品到。这似乎断定，与成果病人相对于，这些病人免疫性加成的调节弱化。

早期数据分析断定，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但癌症病人存在一些功能缺陷，其之后包含对IL-2的加成控制能力降低。此外，癌症病人之后的振荡CD4+T蛋白质似乎对调节愈来愈具抵抗性，展示出为振荡T蛋白质的消除减弱，自然地消除的Treg和体外消除的正向Treg，以及抗原个人经历的CD4+T蛋白质之后IL-2加成减弱。本数据分析的用意是描述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群极较快成果者之后的不同之处，他们的平均比赴援为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX数据分析是一项以人群依此的纵向数据分析，在21岁以下确诊的病人家庭成员之后检查1标准型癌症的危险因素。我们之后描述了长期较快成果者的不同之处，他们保证多重胰岛自身特异性感染性超过10年，但不能注意到癌症的临床数据分析病人，慢性或非同步进行性免疫性。随后，10名暂时保证无癌症并愿意提供大量血浆检验的较快成果者纳入T和B蛋白质功能分析。在目前为止的数据分析之后，8名慢成果者(SP四组)，之后位比赴援43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的胰岛自身特异性感染性。所有的发起者都处于1标准型癌症成果的1期，尽管一些人随后失去了胰岛自身特异性对某些抗原的感染性加成，然而，一名病人已经处于2期至少6年，但不能注意到临床数据分析病人，一名病人被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析之后对该NADP同步进行了单独指标。裂解外周血单个核蛋白质(PBMCs)，选用多参数流式蛋白质练成和T蛋白质消除试验之后指标NADP之后Treg的频赴援、表标准型和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重归)同步进行无指导聚类分析，指标Treg表标准型。

结果：与健康NADP相对于，来自慢成果体的知觉CD4+T蛋白质的指导聚类断定，转录的知觉CD4+ Treg频赴援上升，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)表述上升有关。一名HbA1c升高的病人与成果较快者和匹配的印证四组相对于，Treg五音有所不同。功能分析断定，与健康NADP相对于，来自较快成果体的Treg介导的CD4+振荡T蛋白质消除微小受损。展示出为对振荡CD4+T蛋白质CD25和CD134表述的消除上升。

由此可知1 侧重的表标准型分析断定，CD4+Treg亚标准型在慢成果队列之后上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据记号物表述鉴定出10个元簇:知觉T蛋白质_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T蛋白质;HLA-DR + GITR +知觉T蛋白质;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)运用于9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个键值象征性一个炮兵部队(100个炮兵部队)，愈来愈大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在键值四组周围上色。每个键值之后的饼由此可知回理应单个记号的表述级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以断定整体记号表述。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成由此可知，以及FlowSOM比对的每个元簇的裂口。(e-l)相对轻元素为每个metacluster箱两条路线由此可知(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T蛋白质(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T蛋白质(l)。粉红色圆点象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 运用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg频赴援的上升是成果较快的标志。国际标准门控(a - f)和棉花分析(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的象征性性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述同步进行裂解，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(白斑)四组以及NADPSP 606(粉红色)之后CD25+ cd127的频赴援概要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控兄集的箱两条路线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述气压着色，箭头凸显的簇被比对为SP和HD队列彼此之间的不同。(j)箱两条路线由此可知断定了在SP(白斑)和HD(灰点)四组之后，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对轻元素(比重)。(k)直方由此可知断定每个簇的表标准型(粉红色)和Treg记号相对表述与剧之后表述(蓝色);上列，闪存Treg_3;上面一行，闪存Treg_4。剧之后与所有其他簇之后记号的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知3 与健康献血者相对于，成果较快者知觉treg的GITR上升。每个知觉CD4+T蛋白质元簇(知觉T蛋白质_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T蛋白质;HLA-DR + GITR +知觉T蛋白质;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表述记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热由此可知(sp606不包含在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之后所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表述并联，断定直方由此可知(c)和概要由此可知(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有NADP包含，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不包含在测试之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之后GITR表述，从国际标准门控，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)并联，断定直方由此可知(e)和概要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

由此可知4 来自较快成果的CD4+ treg蛋白质控制振荡CD4+T蛋白质的控制能力降低。SP四组用蓝色的两条路线和圆点回理应，HD四组用银色的两条路线和圆点回理应，粉红色的两条路线/圆点回理应NADPsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质同步进行分选。CD4+CD25−(理应答者)被记号为CFSE, Treg按仔细观察的比重加成物。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质，培育出3天后同步进行流式蛋白质练成样品。(a-d)与CD4+理应答者相对理应的treg培育出(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理应答者培育出。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE消除多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除多于。运用于感染性印证(转录的响理应蛋白质不含treg)计算消除多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 振荡CD4+T蛋白质对较快成果的T蛋白质活化的消除愈来愈寻常。SP四组用蓝色的两条路线和圆点回理应，HD四组用银色的两条路线和圆点回理应，粉红色的两条路线/圆点回理应NADPsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质同步进行分选。CD4+CD25−(理应答者)被cfsel记号，treg按仔细观察的比重加成物。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质，培育出3天后同步进行流式蛋白质练成(CD25反染)和蛋白质因兄分析。HD Treg与HD、SP或sp606理应答者共同培育出。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE消除百分赴援(b)。(c,d) CD25消除百分赴援(c)和CD134消除百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在名教授之后的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们结论的结论是，来自较快成果兄的活化知觉CD4+Treg在GITR表述之后得到了引入和丰富，阐释了进一步数据分析Treg在1标准型癌症高风险幼体之后的异质性的前提。

译者出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28